人髓核細胞永生化

細胞鑒定：免疫熒光鑒定已通過

細胞來源：國內建系

細胞背景：髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結構的一部分，位于兩軟骨板與纖維環 之間。由縱橫交錯的纖維網狀結構即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質構成的彈性膠凍物質。 發育成熟的髓核是一個由軟骨樣細胞分散在細胞間質內，周圍圍繞著一個比較致密的膠原纖 維網的含水球，位于椎間盤偏后位置，占推間盤橫斷面積的 50%～60%；由于它的含水量很高， 并和軟骨終板緊密接觸，是椎間盤接受經軟骨終板主要營養途徑滲透交換營養的主要部分。 該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40 基因

細胞特性：形態：成纖維細胞樣，貼壁生長

          用途：僅供科研使用。

培養條件：1） 準備軟骨細胞專用培養體系；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37 攝氏度，培養箱濕度為 70%-80%。

注意事項：

常溫發貨：收到后 T25 瓶消毒再放置培養箱靜置 2-3 小時后觀察密度和狀態拍照 2-3 張反饋給 銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例 1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1 個 1ml 凍存管，另外一瓶繼續傳代，反復凍存 2-3只后才擴增做實驗，以防突發情況引起斷種。

干冰發貨：常規細胞發貨凍存管 2 只，復蘇 1 只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格 按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知銷售。

貼壁細胞參考：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞 1-2 次。

2. 加入 0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA 于培養瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL）， 置于 37℃培養箱中消化 1-2 分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入 3-4ml含 10%FBS 的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 3-5min，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。 將細胞懸液按 1：2 的比例分到新T25瓶/6cm 培養皿中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按 1:2~1:5 的比例進行。 3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前 3 代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。 4）運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新 配制的完全培養基來培養細胞。

懸浮細胞參考：

懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在 1×105~1×106 個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正 常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中 1000rpm，離心5min，棄去上清，補加 1-2mL 培養液后重懸混勻后將細胞懸液按 1：2 的比例分到新T25 瓶中，添加 6-8ml 按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:4的比例進行。

運輸形式

低溫:1mL 凍存管包裝干冰運輸，收到后-80 度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干

冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

常溫: T25 瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液

氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。