HGF+SV40T 人牙齦成纖維細胞

國內永生化建系

細胞鑒定

免疫熒光染色鑒定

細胞來源

國家資源庫

細胞背景

比較了從健康和患病的人牙齦中獲得的成纖維細胞的膠原蛋白合成。用放射性氨基酸標記細胞，通過CM-纖維素色譜和溴化氰肽分析對合成的膠原蛋白進行NaCl分級分離后表征。研究了2個細胞系，5個來自健康牙齦，1個來自患有慢性炎癥性牙周炎的牙齦，2個來自急性發炎的牙齦。所有細胞系主要合成I型膠原蛋白。III型膠原蛋白是所有細胞系的次要產物，除了來自患病組織的細胞系。來自患病牙齦的六個細胞系中的五個和來自急性發炎組織的兩個細胞系中的兩個合成了可溶于1.3M NaCl的膠原蛋白。α1/α3比率和溴化氰肽圖譜表明該級分含有α1[I]3型膠原蛋白。α<>[I]<>膠原蛋白在從健康牙齦獲得的成纖維細胞系中檢測不到。發炎的人牙齦似乎含有成纖維細胞，其表型與正常組織的細胞不同，因為它們能夠合成α<>[I]<>膠原蛋白。

細胞特性

形態：成纖維細胞樣，貼壁生長。用途：僅供科研使用。

培養條件

1）準備DMEM培養基；優質胎牛血清，10%；p/s雙抗，1%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

注意事項

貼壁細胞參考：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

4）運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。

懸浮細胞參考：

懸浮狀態下生長的細胞，可以通過向培養瓶中添加完全培養基來維持細胞的生長狀態，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:4的比例進行。

運輸形式

常溫發貨：收到后T25瓶消毒再放置培養箱靜置2-3小時后觀察密度和狀態拍照2-3張反饋給銷售，密度達標就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時建議凍存其中一整瓶成1個1ml凍存管，另外一瓶繼續傳代，反復凍存2-3只后才擴增做實驗，以防突發情況引起斷種。

干冰發貨：常規細胞發貨凍存管2只，復蘇1只，另外一只備用，第一個復蘇不成功時嚴格按照廠家要求復蘇第二個，均沒有復蘇成功的情況即時留存復蘇照片通知銷售。

生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。