貼壁細胞參考：

一. 收貨后消毒靜置待細胞全部穩定后拍照。棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

二. T25瓶加入0.25％EDTA胰蛋白酶1-2ml于培養瓶中震蕩混勻，如果屬于貼壁不牢固的細胞很容易脫落的就培養箱外面消化震蕩等脫落90%以上終止消化，一般小于1分鐘以內，甚至不加胰酶有部分貼壁非常不牢固的細胞也會自然震蕩脫落。如果是貼壁牢固的細胞則置于37℃培養箱中消化提高效率，每40-50秒拿出培養箱震蕩幫助細胞脫落，如果脫落90%以上則對應3-6ml含有10%血清的完全培養基終止徹底，以防胰酶殘留。如果貼壁非常牢固的細胞，脫落的比例比較低，也不超過2分鐘后終止消化徹底，再加入1ml完全培養基讓細胞緩沖后再過2分鐘進行二次消化，反復分步消化以降低單次消化時長，減少刺激，保護細胞膜?；虿捎霉萎a刮細胞的方式處理也可以?？倸w原則是達到消化目的的同時減少細胞膜受到的損傷越小越好。

三.消化完成后輕輕吹勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。期間多的細胞一定保存多份細胞凍存管備種。

懸浮細胞參考：

大多數懸浮細胞對于環境比較敏感，建議一直維持高密度生長，一般情況下細胞密度維持在1×10 5到1×10 6個/mL（不同細胞對密度要求不同）。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中800-1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例（首次可以1:1分瓶）分到新T25瓶中，添加5-6ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:4的比例進行。大多數血液類相關的懸浮細胞受運輸影響比較大，會出現一批死細胞，如果因此密度降低了，可以離心后轉移至T25瓶中豎著培養，培養基添加5ml 以提高總體密度，隔一天后觀察密度可以的話再補液3ml完全培養基后T25瓶放倒，等沉淀穩定后觀察細胞密度，持續添加培養基等密度上升足夠傳代為止。